尊龙凯时的HMy2CIR淋巴母细胞培养指南

一、细胞培养条件

创建适宜的细胞培养环境是细胞生长的基础。确保培养基充分，温度控制在37℃，二氧化碳浓度维持在5%是维持细胞活力的重要条件。

二、细胞接收后的处理步骤

收到细胞后，采用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒处理，确保在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便于细胞状态的稳定。透过显微镜观察细胞生长，并记录不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为后续售后服务的依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶则使用自主配制的完全培养基，以进行对比培养。更换培养液时，请确保松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请收集瓶中的完全培养液至离心管中，留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2的孵箱内培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次清洗。
2. 添加约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否大部分变圆并脱落。若是，迅速轻敲培养瓶后加入超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落并吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱继续培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，首先弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。接着，添加约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后立即加入5ml的完全培养液终止消化。然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，细胞沉淀后加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。

冻存细胞可直接放入-80℃冰箱保存。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时后方可安全转移。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶。之后用75%酒精擦拭冻存管外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的培养箱中。第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中，部分细胞可能因未牢固贴壁而发生脱落，这是正常现象。如脱落细胞较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。细胞沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬并消化1-2分钟，最后用5ml完全培养基终止反应，离心、弃上清后加1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例进行分瓶传代，并补充新培养基至5-8ml/瓶，再放置于培养箱中培养。

五、售后条款

1) 细胞出现问题可重发的案例与判定标准

细胞在运输过程中遭遇问题（如丢失、破损、严重漏液等）可申请重发；如存在污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后重发；对于常温运输的细胞静置24小时或干冰运输的细胞复苏后24小时大部分细胞未存活的情况（需提供真实清晰的细胞状态照片）也可申请重发。其他情况包括复苏后24小时内存在污染问题等均需提供详细证据以便核实。

2) 不予重发的案例

以下情况将不予重发：客户造成的细胞污染，客户操作不当导致细胞状态不良，非本库推荐培养体系导致细胞状态不佳，未提供培养前3天的照片，也未及时告知等情况。

我们希望您能充分理解并遵循上述指南，以确保细胞的最佳使用效果。如有疑问，请及时与尊龙凯时联系。