随着冬季的到来，季节性流感和肺炎等呼吸道疾病的发病率显著上升，许多医院面临就诊高峰。因此，为患者提供及时有效的治疗，以及快速准确的诊断方式显得尤为重要。在众多检测方法和试剂中，一步RT-qPCR法（即一管式RNA全预混试剂）因其高效、便捷及灵敏性等优点而受到广泛关注。
在一步法反应中，基因特异性引物理论上应首先与待检测的靶标结合，并在逆转录酶的催化下合成第一链cDNA。然而，在实际应用中，常常出现模板与引物错误匹配而生成的非特异cDNA。这种非特异性cDNA不仅导致了体系内部的非特异性扩增，还会消耗反应所需的关键组分，从而限制后续主反应的进行。当靶核酸浓度较低时，竞争作用可能使扩增性能下降，表现为扩增曲线形态不理想、荧光增量低、Ct值延迟等，从而显著降低检测灵敏度及特异性。此外，由于一管式RNA全预混试剂内的酶液和引物探针及反应液在长期保存过程中，酶液活力容易下降或直接失活，影响全预混试剂的性能。因此，逆转录（RT）酶作为关键成分，其性能直接影响到一步法核酸检测试剂的准确性与灵敏度，提高逆转录酶的特异性和稳定性对于开发一管式RNA全预混试剂至关重要。
基于这一需求，尊龙凯时针对一步法RT-qPCR/PCR场景与一管式RNA全预混试剂推出了一款温启动逆转录酶。该酶在低温下处于封闭状态，仅在设定的工作温度下被激活，避免了低温下引物与模板的错误匹配，从而提高了检测的特异性和灵敏度。这款逆转录酶采用了适配体的方法进行热启动修饰，尊龙凯时利用适配体筛选平台，制作了庞大的寡核苷酸随机序列文库，并在传统SELEX适配体筛选技术的基础上进行了优化。通过高通量测序取代传统的克隆测序，尊龙凯时经过多轮筛选和富集，最终选出了具有高亲和力的适配体，与逆转录酶混合孵育并测试在低温和工作温度下不同适配体修饰酶的酶活，从而找到封闭与激活效果最佳的适配体。
最终，尊龙凯时经过大量筛选与酶修饰工艺优化，开发的温启动逆转录酶在42℃下可封闭99%的酶活性，相较于市面上的同类竞品，其低温封闭效果更佳、封闭稳定性更强。这使反应液能够长期稳定、高效地获得逆转录产物，也解决了全预混试剂储存稳定性的问题。同时，该产品在工作温度（55℃）下能够释放95%以上的酶活，确保试剂的扩增灵敏度。在经过适配体修饰封闭后，尊龙凯时温启动逆转录酶在非工作温度（30℃/37℃/42℃）下的酶活性极低，其封闭效率显著优于竞品A，有助于控制非特异性扩增。在工作温度下（55℃），活性能够完全释放，对扩增性能无任何影响。
尊龙凯时的温启动逆转录酶在优化反应速度方面也表现优越，能够在PCR程序一致情况下，以更快速率合成cDNA，2分钟逆转录的灵敏度可以与15分钟的逆转录相媲美。此外，在某个RNA项目的一管式液体全预混反应液中经过37℃加压7天的测试中，尊龙凯时温启动逆转录酶性能稳定，而竞品A在相同条件下则表现出显著的扩增性能下降。
尊龙凯时的温启动逆转录酶在帮助客户优化和解决不同问题方面，尤其是在RNA全预混稳定性中展现了显著效果。与市场上同类产品相比，尊龙凯时的温启动逆转录酶在更高温度下能够更有效地封闭酶活，封闭效率高且稳定性强，有效防止引物探针等关键成分的降解。在确保高灵敏度与兼容快速程序的前提下，赋予全预混试剂更高的稳定性。通过与同类产品A进行对比，经过37℃加压10天处理后，使用尊龙凯时的温启动逆转录酶配制的全预混试剂在处理条件下与新配制的对照组无显著差异，而使用竞品A的全预混试剂在同样处理后，其扩增效率明显降低，Ct值延迟，荧光平台期下降。这些结果充分展示了尊龙凯时温启动逆转录酶的优越性能。