本操作的全面流程大约需要1小时,包含了匀浆、细胞裂解、去除蛋白和DNA纯化等关键步骤,具体过程如下:

匀浆与细胞裂解
为了从动物组织中提取基因组DNA,需采用适当的匀浆方法,具体细节如下:
使用研钵进行匀浆:
- 取1~100mg的动物或人类组织,放入冰浴预冷的研钵中,迅速且用力地研磨成匀浆。
(注:以下组织需借助液氮研磨成粉末状:富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等;富含胶原蛋白的皮肤、肌腱;富含角质蛋白或坚硬的组织,如骨骼等。) - 加入650μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1,轻柔研磨30秒。
(注:若使用上述特定组织,需在添加SolutionA及RNaseA1后,将研钵置于65℃水浴中研磨1分钟。) - 将650μl的匀浆液转移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650μl,请补充SolutionA至650μl,并在65℃保温5分钟。
使用研磨棒进行匀浆:
- 取1~100mg的动物或人类组织,放入冰浴预冷的Collection Tube中,快速用研磨棒研磨成糊状。
- 加入350μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1,再用研磨棒进行匀浆。
- 加入350μl的SolutionA,将研磨棒上的匀浆转入Collection Tube,充分混合后,65℃保温5分钟。
从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA
- 根据下表,称取适量的新鲜植物材料(如使用冷冻干燥材料,量需减半),剪成小块,放入研钵中,加入液氮,冷冻后迅速研磨至粉末状。为防止样品回温,请间歇加入液氮。
植物材料种类 | 使用量 |
植物花、叶片 | 10~100mg |
植物茎 | 60~240mg |
植物根 | 80~240mg |
植物种子 | 80~240mg |
(注:如提取植物根、种子等基因组DNA含量较低者,需使用超过上述量,分管操作并合并至同一Spin Column过滤。)
提取自全血的基因组DNA
- 取10~250μl的全血(含抗凝剂)加入Collection Tube中。
- 加入500μl的SolutionA。
- 加入1μl的RNaseA1,强烈振荡15秒后,冰浴5分钟。
(注:适用于人和动物的抗凝全血处理量不超过250μl,禽类和两栖类不超过10μl。)
从培养细胞中提取基因组DNA
悬浮培养的动物细胞:
- 使用Collection Tube收集1×105~1.5×107的细胞悬液,5,000rpm离心5分钟,弃去上清。
- 加入150μl灭菌蒸馏水或PBS重悬细胞。
- 加入500μl的SolutionA和0.8μl的RNaseA1,激烈振荡15秒后,室温静置1分钟。
上述流程确保您在提取基因组DNA时获得最佳效果。为提升实验的成功率,推荐使用尊龙凯时的产品辅助进行所有实验步骤,确保高纯度DNA的提取,为后续研究提供坚实基础。