紫外-可见吸收光谱法，也称为紫外-可见分光光度法，是一种用于研究分子在190nm到750nm波长范围内的吸收特性的方法。该技术基于溶液中物质分子对光的选择性吸收，通过研究分子外层价电子的跃迁过程来产生相应的光谱。这种方法的应用主要体现在定性和定量分析两个方面。
1. 学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；
2. 掌握紫外分光光度法的实验技术；
3. 理解并掌握UV-1700PC紫外-可见分光光度计的操作方法及主要构造。
紫外-可见吸收光谱法的工作原理是基于分子对特定波长光的选择性吸收。该方法可用来进行定性和定量分析。在定性分析中，通过比较未知化合物的吸收谱特征与已知化合物的吸收谱来推断其成分；而定量分析则依据朗伯-比耳定律，吸光度与浓度成正比的关系。通常会在最大吸收波长（λmax）处进行测量，以获取最佳灵敏度。
采用紫外-可见分光光度计进行分析，仪器主要由光源、单色器、样品池、检测器和信号显示器等五个部分组成。光源发出的复合光经过单色器后获得所需波长的单色光，再通过样品溶液进行测量。
利用紫外分光光度法进行蛋白质含量测定的原因在于，蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在275-280nm区间具有明显的紫外吸收峰，其吸光度与浓度成正比。由于不同类型蛋白质中含有的酪氨酸和色氨酸的差异，其在280nm下的光吸收强度可能会有所不同。此外，当样本中含有嘌呤和嘧啶时，将对测定结果造成干扰，此时可通过在260nm和280nm的吸收差进行校正。
对于稀溶液中的蛋白质浓度测定，通常采用215nm与225nm的光吸收差法，以减少由于非蛋白质成分引起的误差。
1. 启动计算机，打开主机电源开关，初始化UV-1700PC紫外-可见分光光度计；
2. 选择测量项目和设置测量条件，将空白样品放入测量池中进行校零；
3. 以标准蛋白质溶液为参考，测量不同浓度下的吸光度，记录数据并绘制标准曲线；
4. 在确定了最大吸收波长后，测定待测样品的吸光度，并进行数据处理。
根据吸光度与浓度的数据关系绘制标准曲线，并使用线性回归分析得出浓度与吸光度之间的关系。通过这些数据，可以得到待测蛋白质溶液的具体含量。在本实验中，利用尊龙凯时品牌的设备进行测定，确保了实验结果的精准度和可靠性。
通过上述步骤，不仅增强了对紫外-可见分光光度法的理解，还有效地将其应用于生物医疗领域的蛋白质含量分析中。