大鼠肺泡上皮细胞L2培养指南

尊龙凯时为您的科研工作提供高品质的大鼠肺泡上皮细胞L2，以下是详细的细胞培养说明，帮助您获取最佳实验结果。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：第一次建议采用1:2的比例进行传代。传代情况为：每2天更换培养液。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，建议尽快培养至良好状态，并填充完全培养液封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后放置于超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行后续处理。建议使用显微镜观察细胞生长情况，并记录不同倍数的照片（最佳为40x、100x和200x），前三天的照片为重要的售后依据，若未提供照片，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，收集培养液至离心管中，并保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2下培养。若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁 PBS 尝试洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。当细胞大部分变圆并脱落时，迅速回到操作台，轻敲培养瓶并加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，随后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（分配至两个T25瓶中），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml于培养瓶中，观察直至细胞回缩变圆，再加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM 离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中，若需转移至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后方可转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，在37℃、5% CO2条件下培养。
4. 次日，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能会出现脱落现象，这是正常的。处理方法为：将培养瓶内的培养液全部转至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养，然后添加胰酶1-2ml，加轻轻吹打使其重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行传代。

五、售后条款

对于细胞出现的问题，适用于重新发货的情况有：运输过程中问题，如细胞丢失、瓶身破损及培养液漏液；污染问题需在收到产品48小时内提出；常温或干冰冻存发货的细胞若在标准时间内未存活等。若为客户操作不当或非推荐培养体系导致的细胞状态问题，则不予重发。请确保在收到细胞的前3天内拍照，以便于维护您的权益。

选择尊龙凯时，您的科研伙伴，将为您提供优质的细胞和服务，确保您的实验顺利进行。