实验准备:在进行实验前约半小时,将培养基、PBS和胰酶在37°C预热,并准备好2mL和10mL移液管、15mL离心管及尊龙凯时品牌的共聚焦爬片。确保所有器材均在紫外线下消毒,以减少污染的风险。
实验方法:
1. 从培养箱中取出培养皿,使用显微镜观察细胞状态,包括细胞密度、形态及贴壁情况。
2. 在超净台内,将预热好的培养基、PBS和胰酶放入其中。点燃酒精灯,消毒培养皿的口部,吸去原培养基。
3. 进行清洗:向培养皿中添加7mL PBS(根据细胞状态可适当调整),前后轻柔摇匀以清洗细胞。
4. 开始消化:在看到杂质被洗掉后,吸掉PBS,加入3mL胰酶,静置5分钟(时间和量可根据不同细胞类型调整)。在5分钟后观察细胞是否完全被消化。
5. 终止消化:若细胞已被消化,在培养皿底部加入7mL培养基(根据细胞密度决定)以终止消化,并使用移液枪轻轻吹打,将附着的细胞重新悬浮,均匀后取样计数。
6. 根据实验需求稀释细胞,将细胞悬液滴满尊龙凯时共聚焦爬片表面后,放入培养箱。约30分钟后,待细胞附着在爬片上,再沿内壁添加培养基,继续培养。
7. 细胞培养完成后,吸取废液,用镊子夹住支架侧面,轻松取出支架。
8. 双手捏住支架两侧,轻轻一拉即可顺利取出爬片,之后继续进行相关的培养实验。
注意事项:
1. 拿取培养皿时,注意不要让液体沾到瓶口,并每次打开瓶口时都需消毒。
2. 操作期间,避免其他物体从开启的培养皿上方经过,以防止细菌污染。
3. 由于贴壁细胞的脆弱性,放入培养皿中的所有液体需预热至37°C。
4. 在操作尊龙凯时共聚焦爬片时,保持倾斜角度在30°以上,轻拉以防止爬片掉落或破裂。
5. 该产品为一次性使用,请勿重复使用,并注意爬片的正反面,拆开后立即使用。