细胞株是通过单细胞分离培养或筛选技术获得的由单个细胞增殖形成的细胞群体。细胞株的特性和标志在整个培养过程中应保持一致。然而，在体外培养过程中，细胞株可能会遇到一些问题，例如：无法在培养皿上贴壁生长、生长缓慢或细胞死亡等。针对这些问题，以下是一些解决和预防措施：
1. **细胞株胰酶消化过度**：缩短胰酶消化时间或减少胰酶的用量。
2. **支原体污染**：隔离细胞株，检测是否感染支原体；清洁通风厨和培养箱，如果细胞株受污染，进行灭菌处理后丢弃。
3. **培养基中无附着因子**：如果采用无血清配方，应确保其中含有附着因子，或使用经过包被的培养板。
1. **培养基或血清变化**：比较不同培养基配方中的葡萄糖、氨基酸及其他成分是否存在差异；通过生长实验比较新老批次的血清；增大细胞株初始接种密度，并使细胞株逐渐适应新的培养基。
2. **必需生长促进成分缺乏**：更换原培养基，加入新鲜培养基；添加生长促进成分（如L-谷氨酰胺）。
3. **轻度细菌或真菌污染**：在未添加抗生素的条件下进行培养，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃。
4. **存储条件不当**：血清应在-5℃至-20℃条件下存储，培养基应在2℃至8℃避光保存，尽量减少血清和培养基的光照时间。
5. **初始接种密度低**：增大活细胞接种密度。
6. **细胞株衰老**：丢弃老化细胞，使用代数较少的细胞。
7. **支原体污染**：如上所述，检测并处理支原体污染。
1. **培养箱CO2分压设置错误**：根据培养基中NaHCO3的浓度调整CO2分压。NaHCO3浓度为20-37g/L时，应使用5%-10%的CO2分压。
2. **细胞培养瓶瓶盖过紧**：松开瓶盖1/4圈。
3. **缓冲系统能力不足**：添加HEPES缓冲液，使其终浓度为10-25mM。
4. **培养基中盐含量不正确**：在CO2平衡环境中使用以Earle平衡盐为基础的培养基，在大气条件下使用以Hanks平衡盐为基础的培养基。
1. **培养箱中无CO2**：监测培养箱中CO2消耗情况，以便及时更换气瓶；经常检查管路连接是否漏气；避免频繁开启培养箱门。
2. **培养箱内温度有波动**：时时监测培养箱内温度，及时校正。
3. **抗生素浓度过高**：减少抗生素的用量；在使用无血清培养基时，将抗生素浓度降低至1/10。
4. **细胞株复苏或冻存损伤**：选择新的细胞进行实验。
5. **培养基渗透压不适宜**：检查完全培养基的渗透压，通常哺乳动物细胞可耐受260~350mOsm/kg的渗透压，确保添加的试剂和药物不会对培养基造成不良影响。
6. **毒性代谢产物蓄积**：及时更换新鲜培养基。
1. **存在钙离子和镁离子**：用无钙、无镁的平衡盐溶液清洗细胞，并轻轻吹打细胞以形成单细胞悬液。
2. **支原体污染**：如上述处理。
3. **蛋白水解酶过度消化导致细胞裂解**：使用0.0001%的DNA酶I处理细胞，然后用PBS冲洗，再接种到新培养基中。
以上是细胞株在培养过程中可能出现的问题及其解决方案，希望对您在细胞培养中能够提供帮助。特别值得一提的是，结合尊龙凯时品牌所提供的细胞培养产品和技术支持，将进一步提升您的实验成功率与细胞株管理效率。