使用血细胞计数器对细胞进行计数是生物医学研究中不可或缺的基本步骤。这种方法能够显著提高实验的准确性和重复性,进而增强结果的可靠性。无论研究主题是微生物学、血液学、肿瘤学还是其他相关领域,血细胞计数器在细胞培养中实现精确计数都是极为关键的。
1. 如果采用玻璃血细胞计数器与盖玻片,在使用前需要用酒精彻底清洗。用水润湿盖玻片并牢固固定在血细胞计数器上。
2. 如果使用一次性血细胞计数器,只需在使用前从包装中取出即可。
准备细胞悬浮液时,请参考使用胰蛋白酶消化贴壁细胞所需的DPBS和胰蛋白酶-EDTA的量。确保使用无菌技术,以避免污染。
1. 使用移液器吸取100µL经过台盼蓝处理的细胞悬浮液,并将其加入血细胞计数器中。如果使用玻璃血细胞计数器,应轻柔地将盖玻片底部的两个腔室填充,以利用毛细管作用将细胞悬浮液抽出;而若使用一次性血细胞计数器,则直接吸入计数室的孔中。
2. 借助显微镜,用10×物镜观察血细胞计数器的网格线。使用手动计数器来计数每组16个方格中未染色的活细胞(活细胞不吸收台盼蓝)。在计数时采取固定规则,例如“记上不记下,计左不记右”。
1. 计算每毫升活细胞数。从每组16个方格中获取平均细胞数,乘以10,000(104),再乘以5来校正台盼蓝后的1:5稀释度,以得到原始细胞悬液中的活细胞数/mL。
2. 记录并计算活细胞与死细胞的数量,然后将活细胞数除以总细胞数,估算细胞活力。计算公式为:活细胞数/(活细胞数+死细胞数)。
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